? ? ? ? ? ?
วิธีการแช่แข็งเซลล์สัตว์?
บ้าน / ข่าว / ข่าวอุตสาหกรรม / วิธีการแช่แข็งเซลล์สัตว์?

วิธีการแช่แข็งเซลล์สัตว์?

? ? ? ? ? ? ? ?
Date:2021-09-09 17:23:11 Thursday
Summary: หลังจากที่ห้องปฏิบัติการได้รับสายเซลล์ใหม่แล้ว จะต้องทำการเพาะเลี้ยงและขยายเซลล์ก่อนแล้วจึงแช่แข็ง การเก็บรักษาเซลล์ด้วยการแช่เยือกแข็งในขั้นแรกสามารถใช้เป็นตัวสำรองเมื่อเซลล์สูญเสียไปเนื่องจากมลภาวะและสภาวะอื่นๆ นอกจากนี้ เซลล์เกือบทั้ง......

หลังจากที่ห้องปฏิบัติการได้รับสายเซลล์ใหม่แล้ว จะต้องทำการเพาะเลี้ยงและขยายเซลล์ก่อนแล้วจึงแช่แข็ง การเก็บรักษาเซลล์ด้วยการแช่เยือกแข็งในขั้นแรกสามารถใช้เป็นตัวสำรองเมื่อเซลล์สูญเสียไปเนื่องจากมลภาวะและสภาวะอื่นๆ นอกจากนี้ เซลล์เกือบทั้งหมดยังได้รับการเปลี่ยนแปลงในระดับหนึ่งในระหว่างกระบวนการเพาะเลี้ยงและทางเดิน เพื่อรักษาความสม่ำเสมอของผลการทดลอง โดยทั่วไปไม่สามารถเพาะเลี้ยงเซลล์ได้หลายสิบชั่วอายุคน หากใช้อีกครั้ง จำเป็นต้องละลายและเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ผ่านการแช่เยือกแข็งและมีการเคลื่อนผ่านน้อยกว่าก่อนใช้
มีสี่ประเด็นหลักในกระบวนการแช่แข็งเซลล์ ได้แก่ การเก็บเกี่ยวเซลล์ การใช้สารป้องกัน อัตราการแช่แข็ง และสภาพแวดล้อมในการเก็บรักษา
การเก็บเกี่ยวเซลล์
โดยทั่วไปเซลล์ที่ใช้สำหรับการเก็บรักษาด้วยการแช่เยือกแข็งจะถูกเลือกเมื่อเซลล์มีการบรรจบกันประมาณ 90% ในเวลานี้ การเติบโตของเซลล์ดีและจำนวนเซลล์มีมาก และควรเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อ 24 ชั่วโมงก่อนเก็บเกี่ยวเซลล์ วิธีการเก็บเกี่ยวเซลล์เพื่อการเก็บรักษาด้วยการแช่เยือกแข็งก็เหมือนกับปกติ ปั่นแยกที่ 100xg เป็นเวลา 5 นาทีเพื่อรวบรวมเซลล์และแขวนเซลล์ใหม่ เซลล์ที่มีชีวิตจะถูกนับ เจือจางหรือเข้มข้นเพื่อให้ความเข้มข้นของเซลล์สุดท้ายเป็นสองเท่าสำหรับการรักษาเซลล์ (โดยปกติคือ 4-10 ล้านเซลล์/มล.) เพิ่มปริมาตรที่เท่ากันของสารละลายผสมสารป้องกันตัวกลางในการเพาะเลี้ยงที่เตรียมไว้ และผสมเบาๆ และแบ่งส่วนลงในหลอดเก็บรักษาด้วยความเย็น การเก็บรักษาด้วยความเย็น
การใช้สารป้องกัน
2D Cryogenic Vials 1.5ml Extorsion สีเหลือง
ในการเก็บรักษาด้วยความเย็นของเซลล์ โดยทั่วไป DMSO จะใช้เป็นสารป้องกัน ในการเก็บรักษาด้วยการแช่แข็งของเซลล์ ความเข้มข้นสุดท้ายของ DMSO ที่ใช้โดยทั่วไปคือ 5-15% ความเข้มข้นของ DMSO ในสารละลายการเก็บรักษาด้วยการแช่แข็งของเซลล์เฉพาะสามารถดูได้จาก ATCC สำหรับเซลล์ที่ละเอียดอ่อนโดยเฉพาะ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเซลล์ไฮบริโดมา ควรใช้ซีรัม 95% และ DMSO 5% ในการเก็บรักษาด้วยการแช่เยือกแข็ง เมื่อใช้สารป้องกัน ให้ใช้อาหารเลี้ยงเชื้อหรือซีรัมเพื่อทำให้ความเข้มข้นสุดท้ายเป็นสองเท่า จากนั้นผสมกับอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยในปริมาณที่เท่ากัน
อัตราการเยือกแข็งของเซลล์
อัตราการเยือกแข็งของเซลล์นั้นควบคุมได้ดีที่สุดเพื่อให้มีเวลาเพียงพอสำหรับเซลล์ที่จะขาดน้ำโดยไม่ได้รับความเสียหายจากภาวะขาดน้ำมากเกินไป สำหรับเซลล์ส่วนใหญ่ อุณหภูมิที่ลดลง 1 ถึง 3°C ต่อนาทีนั้นเหมาะสม การดำเนินการตามปกติคือวางเซลล์ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1-2 ชั่วโมง จากนั้นนำไปใส่ในตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ -80°C ค้างคืน (หากไม่มีตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ -80°C คุณสามารถใช้น้ำแข็งแห้งแทนได้) และ จากนั้นถ่ายโอนไปยังถังไนโตรเจนเหลวหรือต่ำกว่า -130 การเก็บรักษาในระยะยาวในตู้เย็นที่อุณหภูมิ ℃
สภาพแวดล้อมในการจัดเก็บ
อุณหภูมิการจัดเก็บระยะยาวของเซลล์คือ -130 ℃ หรือต่ำกว่า อุณหภูมิของชั้นก๊าซในถังไนโตรเจนเหลวอยู่ระหว่าง -140 ℃ ถึง -180 ℃ เซลล์สามารถเก็บไว้ในชั้นก๊าซหรือแช่ในไนโตรเจนเหลว ถ้าเป็นไปได้ ควรเก็บไว้ในชั้นก๊าซ เพราะจะป้องกันไม่ให้ไนโตรเจนเหลวเข้าสู่ห้องแช่แข็งได้ หลอดทำให้เกิดการระเบิดเมื่อนำเซลล์ออก (แต่วิธีนี้สามารถเก็บไนโตรเจนเหลวได้เพียงเล็กน้อยในถังไนโตรเจนเหลว ซึ่งจำเป็นต้องเติมบ่อยๆ) เซลล์ยังสามารถเก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ -80 ℃ เป็นเวลาสองสามเดือนหรือประมาณนั้น
หลอดหมุนเหวี่ยง

หลอดหมุนเหวี่ยง

รุ่นสินค้า ......

หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์

หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์

รุ่นสินค้า ......

เคล็ดลับปิเปต

เคล็ดลับปิเปต

รุ่นสินค้า ความจุ ......

เคล็ดลับการกรอง

เคล็ดลับการกรอง

หมายเลขผลิตภัณฑ์ ความจุ......

อ่างล้างหน้า

อ่างล้างหน้า

รุ่นสินค้า ความจุ ......

โอนปิเปต

โอนปิเปต

รุ่นสินค้า ความยา......

PCR หลอด

PCR หลอด

รุ่นสินค้า ความจุ ......

แผ่น PCR

แผ่น PCR

หมายเลขผลิตภัณฑ์ ความจุ......

การเพาะเลี้ยงลูปและเข็ม

การเพาะเลี้ยงลูปและเข็ม

รุ่นสินค้า ความจุ ......

เครื่องกระจายเซลล์

เครื่องกระจายเซลล์

รุ่นสินค้า วัสดุ ......