Summary: หลังจากที่ห้องปฏิบัติการได้รับสายเซลล์ใหม่แล้ว จะต้องทำการเพาะเลี้ยงและขยายเซลล์ก่อนแล้วจึงแช่แข็ง การเก็บรักษาเซลล์ด้วยการแช่เยือกแข็งในขั้นแรกสามารถใช้เป็นตัวสำรองเมื่อเซลล์สูญเสียไปเนื่องจากมลภาวะและสภาวะอื่นๆ นอกจากนี้ เซลล์เกือบทั้ง......
หลังจากที่ห้องปฏิบัติการได้รับสายเซลล์ใหม่แล้ว จะต้องทำการเพาะเลี้ยงและขยายเซลล์ก่อนแล้วจึงแช่แข็ง การเก็บรักษาเซลล์ด้วยการแช่เยือกแข็งในขั้นแรกสามารถใช้เป็นตัวสำรองเมื่อเซลล์สูญเสียไปเนื่องจากมลภาวะและสภาวะอื่นๆ นอกจากนี้ เซลล์เกือบทั้งหมดยังได้รับการเปลี่ยนแปลงในระดับหนึ่งในระหว่างกระบวนการเพาะเลี้ยงและทางเดิน เพื่อรักษาความสม่ำเสมอของผลการทดลอง โดยทั่วไปไม่สามารถเพาะเลี้ยงเซลล์ได้หลายสิบชั่วอายุคน หากใช้อีกครั้ง จำเป็นต้องละลายและเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ผ่านการแช่เยือกแข็งและมีการเคลื่อนผ่านน้อยกว่าก่อนใช้
มีสี่ประเด็นหลักในกระบวนการแช่แข็งเซลล์ ได้แก่ การเก็บเกี่ยวเซลล์ การใช้สารป้องกัน อัตราการแช่แข็ง และสภาพแวดล้อมในการเก็บรักษา
การเก็บเกี่ยวเซลล์
โดยทั่วไปเซลล์ที่ใช้สำหรับการเก็บรักษาด้วยการแช่เยือกแข็งจะถูกเลือกเมื่อเซลล์มีการบรรจบกันประมาณ 90% ในเวลานี้ การเติบโตของเซลล์ดีและจำนวนเซลล์มีมาก และควรเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อ 24 ชั่วโมงก่อนเก็บเกี่ยวเซลล์ วิธีการเก็บเกี่ยวเซลล์เพื่อการเก็บรักษาด้วยการแช่เยือกแข็งก็เหมือนกับปกติ ปั่นแยกที่ 100xg เป็นเวลา 5 นาทีเพื่อรวบรวมเซลล์และแขวนเซลล์ใหม่ เซลล์ที่มีชีวิตจะถูกนับ เจือจางหรือเข้มข้นเพื่อให้ความเข้มข้นของเซลล์สุดท้ายเป็นสองเท่าสำหรับการรักษาเซลล์ (โดยปกติคือ 4-10 ล้านเซลล์/มล.) เพิ่มปริมาตรที่เท่ากันของสารละลายผสมสารป้องกันตัวกลางในการเพาะเลี้ยงที่เตรียมไว้ และผสมเบาๆ และแบ่งส่วนลงในหลอดเก็บรักษาด้วยความเย็น การเก็บรักษาด้วยความเย็น
การใช้สารป้องกัน
ในการเก็บรักษาด้วยความเย็นของเซลล์ โดยทั่วไป DMSO จะใช้เป็นสารป้องกัน ในการเก็บรักษาด้วยการแช่แข็งของเซลล์ ความเข้มข้นสุดท้ายของ DMSO ที่ใช้โดยทั่วไปคือ 5-15% ความเข้มข้นของ DMSO ในสารละลายการเก็บรักษาด้วยการแช่แข็งของเซลล์เฉพาะสามารถดูได้จาก ATCC สำหรับเซลล์ที่ละเอียดอ่อนโดยเฉพาะ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเซลล์ไฮบริโดมา ควรใช้ซีรัม 95% และ DMSO 5% ในการเก็บรักษาด้วยการแช่เยือกแข็ง เมื่อใช้สารป้องกัน ให้ใช้อาหารเลี้ยงเชื้อหรือซีรัมเพื่อทำให้ความเข้มข้นสุดท้ายเป็นสองเท่า จากนั้นผสมกับอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยในปริมาณที่เท่ากัน อัตราการเยือกแข็งของเซลล์
อัตราการเยือกแข็งของเซลล์นั้นควบคุมได้ดีที่สุดเพื่อให้มีเวลาเพียงพอสำหรับเซลล์ที่จะขาดน้ำโดยไม่ได้รับความเสียหายจากภาวะขาดน้ำมากเกินไป สำหรับเซลล์ส่วนใหญ่ อุณหภูมิที่ลดลง 1 ถึง 3°C ต่อนาทีนั้นเหมาะสม การดำเนินการตามปกติคือวางเซลล์ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1-2 ชั่วโมง จากนั้นนำไปใส่ในตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ -80°C ค้างคืน (หากไม่มีตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ -80°C คุณสามารถใช้น้ำแข็งแห้งแทนได้) และ จากนั้นถ่ายโอนไปยังถังไนโตรเจนเหลวหรือต่ำกว่า -130 การเก็บรักษาในระยะยาวในตู้เย็นที่อุณหภูมิ ℃
สภาพแวดล้อมในการจัดเก็บ
อุณหภูมิการจัดเก็บระยะยาวของเซลล์คือ -130 ℃ หรือต่ำกว่า อุณหภูมิของชั้นก๊าซในถังไนโตรเจนเหลวอยู่ระหว่าง -140 ℃ ถึง -180 ℃ เซลล์สามารถเก็บไว้ในชั้นก๊าซหรือแช่ในไนโตรเจนเหลว ถ้าเป็นไปได้ ควรเก็บไว้ในชั้นก๊าซ เพราะจะป้องกันไม่ให้ไนโตรเจนเหลวเข้าสู่ห้องแช่แข็งได้ หลอดทำให้เกิดการระเบิดเมื่อนำเซลล์ออก (แต่วิธีนี้สามารถเก็บไนโตรเจนเหลวได้เพียงเล็กน้อยในถังไนโตรเจนเหลว ซึ่งจำเป็นต้องเติมบ่อยๆ) เซลล์ยังสามารถเก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ -80 ℃ เป็นเวลาสองสามเดือนหรือประมาณนั้น
英语
阿拉伯语
���ļ���