จะทำความสะอาดและสร้างคอลัมน์ใหม่หลังจากการปนเปื้อนได้อย่างไร?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: เมื่อคอลัมน์โครมาโตกราฟีปนเปื้อน พฤติกรรมโครมาโตกราฟีของคอลัมน์จะค่อนข้างแตกต่างจากคอลัมน์ที่ไม่ปนเปื้อน คอลัมน์ที่ปนเปื้อนอาจทำให้เกิดปัญหาแรงดันย้อนกลับ คอลัมน์เฟสย้อนกลับที่ปนเปื้อนจะต้องทำความสะอาดและสร้างใหม่เพื่อฟื้นฟูสภาพการทำงานเดิม ก......

เมื่อคอลัมน์โครมาโตกราฟีปนเปื้อน พฤติกรรมโครมาโตกราฟีของคอลัมน์จะค่อนข้างแตกต่างจากคอลัมน์ที่ไม่ปนเปื้อน คอลัมน์ที่ปนเปื้อนอาจทำให้เกิดปัญหาแรงดันย้อนกลับ คอลัมน์เฟสย้อนกลับที่ปนเปื้อนจะต้องทำความสะอาดและสร้างใหม่เพื่อฟื้นฟูสภาพการทำงานเดิม
กุญแจสำคัญในการสร้างคอลัมน์ HPLC ที่ปนเปื้อนขึ้นใหม่คือการรู้ธรรมชาติของสารปนเปื้อนและค้นหาตัวทำละลายที่เหมาะสมเพื่อกำจัดออก หากการปนเปื้อนเกิดจากการสะสมของสารที่ตกค้างอย่างหนักในระหว่างการฉีดซ้ำ ขั้นตอนง่ายๆ ในการกำจัดสิ่งปนเปื้อนเหล่านี้มักจะสามารถฟื้นฟูพฤติกรรมทางโครมาโตกราฟีได้ ในบางครั้ง หลังจากดำเนินการหลายครั้ง คอลัมน์โครมาโตกราฟีจะถูกล้างด้วยตัวทำละลาย B 90-100% (ตัวทำละลายที่แรงกว่าในระบบรีเวิร์สเฟสสองตัวทำละลาย) เป็นเวลา 20 ปริมาตรเพื่อขจัดสิ่งปนเปื้อน ตัวอย่างเช่น ตัวทำละลายที่ไม่ใช่น้ำ เช่น เมทานอล, อะซีโตไนไตรล์ และเตตระไฮโดรฟูราน สามารถใช้สำหรับลิปิดตกค้างในคอลัมน์

โดยทั่วไป วิธีการทำความสะอาดทั้งหมดมีรูปแบบที่คล้ายคลึงกัน ตัวทำละลายที่ใช้จะเพิ่มขึ้นตามความแรงของตัวทำละลาย บ่อยครั้งที่ตัวทำละลายสุดท้ายไม่ชอบน้ำมาก (เช่นเอทิลอะซิเตทหรือแม้แต่ไฮโดรคาร์บอน) และสามารถใช้เพื่อละลายสารที่ไม่มีขั้วเช่นไขมันและน้ำมัน เราต้องตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวทำละลายแต่ละตัวในชุดตัวทำละลายสามารถผสมกับตัวทำละลายตัวถัดไปได้
เมื่อสิ้นสุดกระบวนการทำความสะอาด จำเป็นต้องกลับสู่ระบบตัวทำละลายเดิมโดยใช้ตัวทำละลายผสมที่มีความเข้มข้นปานกลาง ตัวอย่างเช่น ไอโซโพรพานอลเป็นตัวทำละลายที่ดีมากในฐานะขั้นตอนขั้นกลาง เนื่องจากสามารถผสมกับเอ็น-เฮกเซนหรือไดคลอโรมีเทนและตัวทำละลายเฟสน้ำด้วย อย่างไรก็ตาม ความหนืดของไอโซโพรพานอลนั้นสูงมาก และต้องแน่ใจว่ามีอัตราการไหลต่ำเพื่อหลีกเลี่ยงแรงดันปั๊มที่มากเกินไป เมื่อล้างคอลัมน์โครมาโตกราฟี น้ำยาล้างจะเชื่อมต่อโดยตรงกับขวดทิ้งขยะจากปลายทางออกของคอลัมน์โครมาโตกราฟี และไม่สามารถไหลผ่านเซลล์ตรวจจับเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของเซลล์ตรวจจับ
คอลัมน์โครมาโตกราฟีแบบย้อนกลับไม่ใช้สารละลายบัฟเฟอร์ โปรดใช้ชุดตัวทำละลายต่อไปนี้เพื่อสร้างใหม่:
เมทานอล 100% → อะซีโตไนไตรล์ 100% → 75% อะซีโตไนไตรล์-25% ไอโซโพรพานอล → 100% ไอโซโพรพานอล → เมทิลีนคลอไรด์ 100% → เอ็น-เฮกเซน 100% → เมทิลีนคลอไรด์ 100% → ไอโซโพรพานอล 100% → อะซีโตไนไตรล์ 100%
คอลัมน์โครมาโตกราฟีแบบย้อนกลับใช้สารละลายบัฟเฟอร์ โปรดใช้ชุดตัวทำละลายต่อไปนี้เพื่อสร้างใหม่:
น้ำ → อะซิโตไนไทรล์ → คลอโรฟอร์ม (หรือไอโซโพรพานอล) → อะซิโตไนไทรล์ → น้ำ.