วิธีการเลือกคอลัมน์ที่ถูกต้อง?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday

Summary: ① เมทริกซ์การบรรจุคอลัมน์โครมาโตกราฟี A. ซิลิกาเจลเมทริกซ์: มีความบริสุทธิ์สูง ต้นทุนต่ำ ความแข็งแรงสูง ดัดแปลงทางเคมีได้ง่าย แต่ช่วง pH มีจำกัด สารตัวเติมซิลิกาเมทริกซ์ส่วนใหญ่มีความเสถียรระหว่าง pH 2-8 แต่เฟสพันธะซิลิกาเจลที่ดัดแปลงเป็นพิเศษ......

① เมทริกซ์การบรรจุคอลัมน์โครมาโตกราฟี
A. ซิลิกาเจลเมทริกซ์: มีความบริสุทธิ์สูง ต้นทุนต่ำ ความแข็งแรงสูง ดัดแปลงทางเคมีได้ง่าย แต่ช่วง pH มีจำกัด สารตัวเติมซิลิกาเมทริกซ์ส่วนใหญ่มีความเสถียรระหว่าง pH 2-8 แต่เฟสพันธะซิลิกาเจลที่ดัดแปลงเป็นพิเศษสามารถคงตัวได้ที่ pH 1.5-10
B. พอลิเมอร์เมทริกซ์: ช่วง pH ในการใช้งานกว้าง อุณหภูมิคงที่ (อุณหภูมิสูงถึง 80 องศา) และความแข็งแรงเชิงกลต่ำ
②รูปร่างของอนุภาค
ฟิลเลอร์ HPLC ที่ทันสมัยส่วนใหญ่เป็นอนุภาคทรงกลม แต่บางครั้งก็มีอนุภาคที่ไม่สม่ำเสมอ อนุภาคทรงกลมให้แรงดันคอลัมน์ที่ต่ำกว่า ประสิทธิภาพและความคงตัวของคอลัมน์ที่สูงขึ้น และอายุคอลัมน์ที่ยาวนานขึ้น เมื่อใช้เฟสที่มีความหนืดสูง อนุภาคที่ผิดปกติมีพื้นที่ผิวจำเพาะที่ใหญ่กว่าและราคาค่อนข้างต่ำ
③ขนาดอนุภาค
ขนาดอนุภาคที่เล็กกว่า ประสิทธิภาพที่สูงขึ้นและความละเอียดที่สูงขึ้น แต่ในขณะเดียวกันก็จะทำให้แรงดันคอลัมน์สูงขึ้น เลือกวัสดุบรรจุภัณฑ์ขนาด1.5-3μmเพื่อแก้ปัญหาตัวอย่างที่ซับซ้อน UPLC สามารถใช้บรรจุภัณฑ์ขนาด1.5μm การบรรจุขนาดอนุภาค10μmหรือใหญ่กว่านั้นใช้เป็นคอลัมน์กึ่งเตรียมหรือเตรียมการ
④ปริมาณคาร์บอน
ปริมาณคาร์บอนของคอลัมน์โครมาโตกราฟีหมายถึงอัตราส่วนของเฟสพันธะบนพื้นผิวของซิลิกาเจล ซึ่งสัมพันธ์กับพื้นที่ผิวจำเพาะและการครอบคลุมพันธะ ปริมาณคาร์บอนสูงช่วยเพิ่มความจุของคอลัมน์ ความละเอียด และเวลาในการวิเคราะห์ และใช้สำหรับตัวอย่างที่ซับซ้อนซึ่งต้องการความละเอียดสูง ปริมาณคาร์บอนต่ำมีเวลาวิเคราะห์สั้น ๆ และแสดงการเลือกที่แตกต่างกัน และใช้สำหรับการวิเคราะห์อย่างรวดเร็วของตัวอย่างอย่างง่ายและเฟสแอคทีฟที่มีน้ำสูง ตัวอย่างสภาพ โดยทั่วไป ปริมาณคาร์บอนของ C18 จะอยู่ในช่วง 7-19%
⑤ ขนาดรูพรุนและพื้นที่ผิวจำเพาะ
ตัวกลางดูดซับ HPLC เป็นอนุภาคที่มีรูพรุน และพื้นผิวของปฏิกิริยาส่วนใหญ่อยู่ในรูพรุน ดังนั้นโมเลกุลจึงต้องเข้าไปในรูพรุนเพื่อดูดซับและแยกออก
ขนาดรูพรุนของคอลัมน์โครมาโตกราฟีและพื้นที่ผิวจำเพาะเป็นแนวคิดเสริมสองประการ ขนาดรูพรุนมีขนาดเล็กและพื้นที่ผิวจำเพาะมีขนาดใหญ่ และในทางกลับกัน พื้นที่ผิวจำเพาะขนาดใหญ่ เพิ่มปฏิกิริยาระหว่างตัวอย่างกับเฟสพันธะ เพิ่มการจัดเก็บ การโหลดตัวอย่าง และการแยกส่วนประกอบที่ซับซ้อน พื้นที่ผิวจำเพาะขนาดเล็ก เวลาสมดุลอย่างรวดเร็ว เหมาะสำหรับการวิเคราะห์การไล่ระดับสี
⑥ ปริมาณรูพรุนและความแข็งแรงทางกล
ปริมาณรูพรุนหรือที่เรียกว่า "ปริมาตรรูพรุน" หมายถึงขนาดของปริมาตรโมฆะต่ออนุภาค สามารถสะท้อนความแข็งแรงเชิงกลของฟิลเลอร์ได้ดี ฟิลเลอร์ที่มีปริมาตรรูพรุนมากจะมีความแข็งแรงเชิงกลน้อยกว่าสารที่มีรูพรุนเล็กน้อย สารตัวเติมที่มีปริมาตรรูพรุน 1.5 มล./กรัมหรือน้อยกว่าส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการแยกด้วย HPLC ในขณะที่สารตัวเติมที่มีปริมาตรรูพรุนมากกว่า 1.5 มล./กรัม จะใช้สำหรับโครมาโตกราฟีแบบแยกตามขนาดและโครมาโตกราฟีแรงดันต่ำ
⑦ ฝาท้าย
การปิดฝาท้ายคอลัมน์สามารถลดยอดส่วนท้ายของสารประกอบเบสพื้นฐานที่มีขั้วได้เนื่องจากการทำงานร่วมกันกับกลุ่มซิลานอลที่เปิดเผย เฟสพันธะที่ปลดบล็อกจะมีความสามารถในการคัดเลือกที่แตกต่างกันเมื่อเทียบกับเฟสพันธะที่ถูกบล็อก โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับตัวอย่างขั้ว